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    植物組培莖尖培養



    錄入時間:2011-12-28 9:55:06 來源:互聯網

      

    概念:是切取莖尖部分或莖尖分生組織部分,進行培養的過程。這是組織培養中用得較多的外植體。因為莖尖分生區是四個分區的主要部分。

     

    莖尖培養可分為微莖尖培養和普通莖尖培養。

     

    1)微莖尖:指帶有1-2個葉原基的生長錐,其長度不超過0.5mm。()

     

    2)普通莖尖:指取幾mm到幾十mm長的頂芽尖及側芽尖。這里主要介紹后者。

     

    特點:技術簡單,操作方便,易成活和分化,成苗時間短。

     

    步驟如下:

     

       1.取材:挑選潔凈、無污染,生長不久的莖,從植物的莖、藤或匍匐枝上切取2cm以上的頂梢。木本植物可事先對莖尖噴幾次滅菌藥劑。用于普通莖尖培養。

     

       2.消毒  將采到的莖尖切成0.51.0cm長,并將大葉除去,休眠芽預先剝除鱗片。()將莖尖置于流水沖洗干凈,再在95%的酒精中處理30秒,然后在稀釋20倍的次氯酸鈉中浸5~8分鐘,最后用無菌水沖洗數次,瀝干后準備接種。

     

       3接種  為了減少污染,在接種前再剝掉一些幼葉,使莖尖為0.5cm大小左右。用作快速繁殖。

     

    注意:一要防褐化。接種時,不用銹刀,動作敏捷,隨切隨接,用15%VC液浸泡處理。

     

          二要防干燥

     

       4.培養

     

       1)培養基:采用MS培養基或略加修改,或補加其它物質。也可用其它培養基如White,Heller等。

     

    培養基中生長素是必須的,如2,4-D,IAA,NAA等,但是濃度不能太高,一般用0.1mg/L左右,若高易產生畸形芽或形成愈傷組織。

     

    2)培養問題處理:

     

    莖尖在培養過程中會出現生長太慢、生長太快和生長正常等三種類型。

     

    I生長太慢:接種后莖尖不增大,只是莖尖逐漸變綠,出現綠色小點,細胞逐漸老化而進入休眠狀態,或者逐漸變褐死亡。引起原因的是生長素濃度太低,或是溫度過低或過高;

     

    II生長太快型:是接種后莖尖迅速增大,在莖尖基部產生愈傷組織,并迅速增殖,而莖尖不伸長,久之莖尖也形成愈傷組織,從而喪失發育成苗的能力。引起原因一是生長素濃度過高,引起細胞瘋狂分裂而導致愈傷組織的形成。二是光照太弱或溫度太高。

     

    III生長正常型是接種后莖尖基部稍增大并形成少量愈傷組織,莖尖顏色逐漸變綠,并逐漸伸長,葉原基發育成可見的小葉,進而形成小苗。

     

       3)培養條件:培養時每天光照可長一些,最長達16h/d,照度1500-3000Lx,溫度25±2℃。并且根據不同植物種類,或者隨培養過程的不同,給予適當的晝夜溫差等處理。

     

    注意:防培養基干燥,由于莖尖培養時間較長,通過定期轉移、嚴加封口等。一般莖尖培養在40天左右可直接長成新梢。

     

       3)繼代培養  用莖段切割法。

     

    繼代培養可用MS0培養基�;蛴蒙L物質較低的MS培養基。

     

    也可邊增殖邊生根培養

     

       4)誘導生根

     

    I 1/2 MS培養基, 并只加入生長素類調節物質,如NAA 、IBA等。注意濃度

     

    II)也可將切下的新梢基部浸入50100ppmIBA溶液處理48小時,然后轉移到無激素的生根培養基中。

     

    III注意較高濃度的生長素對生根有抑制作用。

     

    5移栽馴化

     

    指標:發現新梢基部生有較濃密的不定根,生長健壯而發達,長度在1cm以內。

     

    移栽:可先進行幾天煉苗程,取出---洗培養基--栽入馴化器皿—基質蛭石:珍珠巖:草炭土為1:1:0.5。

     

        栽后管理:1)初期保持濕度。基質澆透水,床面澆濕,搭小拱棚等,并且初期要常噴霧處理,2)后期逐漸減少濕度。拱棚兩端打開通風,減少噴水次數。以后揭去拱棚,并控制水分。

     

        溫度管理上要掌握適宜的生根溫度,最適宜的溫度是1620℃,春季地溫較低時,可用電熱線來加溫。

     

        光照:初期弱光照,加蓋遮陽網或報紙等,后期可直接利用自然光照。

     

     

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