一、產品用途及原理
用途:用于大腸埃希氏菌、O157菌、單增李斯特氏菌、腸桿菌科等的生化鑒定。
添加劑:每盒需配套1盒甲基紅試劑盒HB8280與1盒V-P試劑盒HB8281使用。
原理:䏡胨提供碳氮源、維生素和生長因子;葡萄糖為可發酵的糖類;磷酸氫二鉀是緩沖劑。
MR實驗中,不同細菌分解葡萄糖的產物不同,大腸埃希氏菌、單增李斯特氏菌可分解葡萄糖產生大量酸,使pH值下降到4.5以下,滴入甲基紅顯紅色,即為MR陽性;產氣腸桿菌產酸較少,滴入甲基紅顯橙黃色。
V-P實驗中產氣腸桿菌、單增李特氏菌分解葡萄糖產生丙酮酸,并使丙酮酸脫羧,生成中性的乙酰甲基甲醇,在堿性溶液中被空氣氧化生成二乙酰,繼續與培養基中的胍基反應生成紅色化合物,即為V-P陽性。
二、培養基配方(g/L)
䏡胨 |
7.0 |
葡萄糖 |
5.0 |
磷酸氫二鉀 |
5.0 |
pH值6.9±0.2(25℃) |
三、試驗方法
1、取適量培養物制備菌懸液,接種于MR-VP生化管中,36℃±1℃培養24h-48h。
2、甲基紅(MR)試驗
按照甲基紅試劑盒說明書滴加甲基紅試劑,立即觀察結果。鮮紅色為陽性,黃色為陰性。
3、V-P試驗
按照V-P試劑盒說明書滴加V-P試劑,充分振搖生化管,觀察結果。陽性反應立刻或于數分鐘內出現紅色,如為陰性,應放在36℃±1℃繼續培養4h再進行觀察。
四、質控結果
接種以下質控菌株,放置于36℃±1℃需氧培養24h-48h。結果如圖1。
質控菌株 |
菌株編號 |
接種量(CFU) |
方法 |
質控結果 |
大腸埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
>5000 |
定性 |
MR:+(變紅);VP:- |
單增李斯特氏菌 |
ATCC 19114 |
>5000 |
定性 |
MR:+(變紅);VP:+(變紅) |
普通變形桿菌 |
ATCC 13355 |
>5000 |
定性 |
MR:+(變紅);VP:- |
產氣腸桿菌 |
ATCC 13048 |
>5000 |
定性 |
MR:-;VP:+(變紅) |
大腸埃希氏菌O157 |
ATCC 35150 |
>5000 |
定性 |
MR:+(變紅);VP:- |
培養24h:
培養32h:
培養40h:
培養44h:
培養48h:
培養52h:
圖1 MR-VP生化鑒定管微生物質控結果
由圖1所示,接種質控菌液后培養24h至52h的生化鑒定結果均相同。
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注:本文屬海博生物原創,未經允許不得轉載。